一个编码4个不同基因RNAi的shRNA质粒的构建及其对CNE-2Z细胞增殖、凋亡和小鼠鼻咽癌移植瘤的影响

• 作者: 宋英 杨海峰 董明敏
• 来源期刊: 郑州大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒构建与鉴定 短发卡RNA 鼻咽癌 CNE-2Z细胞 小鼠
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 972-977
• 分类号: R739.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2010.06.029

摘要

目的：构建同时表达VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因的shRNA真核表达质粒,研究其对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z的干扰作用。方法：根据VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因序列,各设计2条寡核苷酸序列,合成互补DNA链,插入真核表达质粒pGenesil-1中,同时构建单基因（VEGF）质粒pGenesil-2。分别转染CNE-2Z细胞,分为多基因质粒（P-1）组和单基因质粒（P-2）组,并设空白对照（BC）组和阴性对照（NC）组。采用MTT法检测细胞增殖活性。采用实时定量PCR和Western-blot检测4种基因在人鼻咽癌细胞系CNE-2Z中的表达。体内裸鼠成瘤实验观察单基因和多基因质粒干预对肿瘤的抑制作用。结果：通过酶切和测序证实重组真核表达载体构建正确。MTT显示细胞增殖受到抑制,且多基因质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因质粒。目的基因在mRNA和蛋白水平上表达均下降。裸鼠实验显示P-1组抑制肿瘤细胞增长的作用要强于P-2组。结论：成功构建一个载体编码4个不同基因的shRNA质粒载体系统。转染鼻咽癌细胞后,与单独沉默VEGF相比,同时干扰VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因可以更好地抑制细胞增殖。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董明敏	郑州大学第一附属医院耳鼻喉科	189	808	15.0	20.0
2	宋英	郑州大学第一附属医院耳鼻喉科	6	31	4.0	5.0
3	杨海峰	郑州市管城区疾病预防控制中心疾病控制科	3	17	2.0	3.0