猪圆环病毒2型ORF2基因原核表达蛋白间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 肖冲 胡桂学 高瑞峰 高超
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 原核表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（32）
• 页码范围: 18224-18226
• 分类号: S858.28
• 字数: 3044字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.32.093

摘要

[目的]建立一种检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法.[方法]从已构建的克隆质粒pMD-ORF2上酶切回收ORF2基因的羧基端部分ORFc片段,克隆到pGEX-6P-1表达载体上,构建原核表达质粒pGEX-ORFc,转化入大肠杆菌BL21进行原核表达,用Western-blot法检测纯化蛋白,将其作为抗原包被酶标板,优化间接ELISA试验条件,从而建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法.[结果]重组表达质粒的酶切鉴定证明已成功构建重组表达质粒pGEX-ORFc,其在E.coli BL21中诱导5、6 h时表达效果最好.纯化后的蛋白条带与原重组菌位置一致均在40.0 kD处,证明重组蛋白得到良好纯化.试验确定抗原最佳包被浓度为12.85 μg/ml,血清稀释度为1:40.3次重复检测表明,变异系数最大为7.12％.[结论]建立的ELISA方法对检测PCV2感染具有良好的特异性及重复性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡桂学	吉林农业大学动物科学技术学院	185	837	15.0	21.0
2	高瑞峰	吉林农业大学发展学院动物科技学院	20	45	4.0	6.0
3	高超	吉林农业大学发展学院动物科技学院	8	42	4.0	6.0
4	肖冲	吉林大学农学部畜牧兽医学院	11	12	2.0	3.0