稳定表达绿色荧光的大鼠胚胎来源肝干细胞

• 作者: 叶章群 姚炜敏 杨欢 王博涵 陈志强
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 肝干细胞 细胞培养 CD34 CK19 转染
• 年，卷（期）: 2010,（23）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4295-4298
• 分类号: R394.2
• 字数: 4801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.23.026

摘要

背景:胎肝来源肝干细胞作为细胞移植的供体来源具有优势,但有鉴于干细胞特质,其培养困难,传代后易分化生长;且现有干细胞示踪定位技术欠成熟,这些均是制约肝干细胞移植的重要因素.目的:观察原代肝干细胞电转pEGFP-Cl质粒是否能获得稳定表达绿色荧光的肝干细胞.方法:联合机械分离和胶原酶消化法体外分离孕13.5 d SD大鼠胚胎来源肝细胞,应用特异培养基培养分离细胞,随后通过半量换液法纯化出肝干细胞,采用细胞免疫荧光法对贴壁细胞进行鉴定,并用pEGFP-Cl质粒电转染原代肝干细胞后持续表达绿色荧光作示踪定位标志.结果与结论:原代培养的胎肝干细胞24 h后可见细胞半贴壁,形态基本相同, 呈圆形或卵圆形;第2天观察细胞为大小几乎一致的圆形;培养第3天出现一些由3,5 个形态一致的细胞集落, 细胞直径6～10 μm;细胞集落不断增大,至第5天集落中细胞数量增至10个左右,集落由大小不等的致密圆形细胞组成,界限清楚;第8天后细胞呈上皮样铺展;第12天时,细胞变大呈煎蛋样摊开,形态不规则,细胞浆内可见颗粒,生长变得缓慢;传代后细胞扩增速度无明显变化,至第3代仍保持较均一的上皮细胞状;通过细胞免疫荧光法检测出培养第5天的贴壁细胞表达干细胞标志物CD34和胆管细胞标志物CK19;经筛选pEGFP-Cl质粒电转染后的原代肝干细胞能稳定表达绿色荧光.实验成功构建转染了绿色荧光蛋白的肝干细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶章群	华中科技大学同济医院泌尿外科	497	4467	31.0	47.0
2	陈志强	华中科技大学同济医院泌尿外科	113	829	14.0	25.0
3	杨欢	华中科技大学同济医院泌尿外科	22	121	7.0	10.0
4	王博涵	华中科技大学同济医院泌尿外科	7	9	2.0	2.0
5	姚炜敏	华中科技大学同济医院泌尿外科	6	7	2.0	2.0