抗黄瓜花叶病毒RNAi载体的构建及烟草的转化

• 作者: 乔亚红 向本春 崔百明 张瑜 赵峰玉 郑银英
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 医学
• 关键词: 黄瓜花叶病毒 同源性 RNAi载体 烟草 转化
• 年，卷（期）: 2010,（23）
• 页码范围: 12337-12340
• 分类号: R392.12
• 字数: 2724字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.23.013

摘要

[目的]构建抗黄瓜花叶病毒RNAi载体,并将载体转入烟草.[方法]采用RT-PCR方法,扩增黄瓜花叶病毒NS04加工番茄分离物的RNA2基因组的序列.选取CMV RAN2基因组中的复制酶片段作为靶序列,构建pBi35SCR2真核表达载体,并对表达载体进行鉴定;通过农杆菌介导的方法将表达载体转入烟草,用PCR的方法检测载体是否转入.[结果]系统进化树分析结果表明,RNA2中编码CMV-2a的序列与中国浙江的DQ412731分离物有较高核苷酸及氨基酸同源性,分别达到98.0%和96.5%;PCR结果表明,试验成功构建了pBi35SCR2真核表达载体,并成功将表达载体转入烟草.[结论]试验获得的转基因烟草可作为后期攻毒试验的材料,并为研究加工番茄抗黄瓜花叶病毒奠定了基础.