戊二酸致原代培养纹状体神经元神经毒性的体外研究

• 作者: 宁琴 田凤艳 罗小平
• 来源期刊: 实用儿科临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 戊二酸血症Ⅰ型 原代培养 神经毒性
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 小儿神经基础与临床
• 页码范围: 602-605,608
• 分类号: R729
• 字数: 4559字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-515X.2011.08.019

摘要

目的 探讨戊二酸(GA)干预体外培养纹状体神经元致神经元损伤的浓度和时间及其损伤机制.方法 体外培养新生大鼠纹状体神经元,于体外培养7 d行神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色鉴定神经元纯度.纯度达90%以上,用不同浓度GA(1～50 mmol·L-1)孵育体外培养10 d的纹状体神经元24～96 h.倒置显微镜及赫斯特荧光染料33342(-/+)荧光活细胞染色后荧光显微镜观察神经元形态变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测细胞线粒体功能变化;膜联蛋白-V/碘化丙啶双染流式细胞仪检测判断GA诱导纹状体神经元凋亡率及死亡率;实时定量反转录(RT)-PCR及Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase)-3、Caspase-9表达.结果 GA处理组细胞线粒体功能受损程度呈浓度及时间依赖性改变:随着GA浓度升高,干预时间延长,神经元损伤加重.与正常对照组比较,10 mmol·L-1、25 mmol·L-1、50 mmol·L-1组GA干预24～72 h纹状体神经元活力均比正常对照组显著增高(P<0.05);1 mmol·L-1组干预72 h、96 h与正常对照组比较均明显升高(Pa<0.01).50 mmol·L-1组孵育72 h较孵育48 h细胞凋亡显著增加[(87.63±9.17)% vs (40.90±4.10)%,P<0.01];25 mmol·L-1组孵育72 h凋亡率为(24.73±2.95)%.10 mmol·L-1、25 mmol·L-1、50 mmol·L-1 GA作用神经元1 h、6 h,Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达明显增加,25 mmol·L-1、50 mmol·L-1 GA处理24 h后神经元Caspase-9、Caspase-3蛋白活化片段增加.结论 GA致纹状体神经元损伤呈浓度-时间依赖性,通过Caspase-9/Caspase-3途径诱导纹状体神经元凋亡,该机制可能与GA血症Ⅰ型大鼠纹状体退行性变有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宁琴	华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科	116	568	12.0	16.0
2	罗小平	华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科	219	1179	17.0	22.0
3	田凤艳	华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科	4	16	2.0	4.0