荧光定量PCR快速检测淡色库蚊击倒抗性相关钠通道基因突变(L1014F)

• 作者: 李春晓 汪中明 王忠灿 董言德 谭伟龙 赵彤言
• 来源期刊: 寄生虫与医学昆虫学报
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光定量PCR 淡色库蚊 击倒抗性 钠通道
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 著述
• 页码范围: 156-160
• 分类号: R38
• 字数: 3032字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2011.03.006

摘要

本研究的目的是采用荧光定量PCR扩增技术,建立快速检测淡色库蚊Culex pipiens pallens钠离子通道L1014位点击倒抗性(Knockdown resistance,kdr)相关点突变方法,该方法的原理是以突变位点为3′端设计两条特异性上游引物,和一条非特异下游引物组成两对引物平行双管法,用荧光定量PCR扩增快速检测淡色库蚊钠通道L1014F突变的SS,SR,RR 3种基因型.用此方法对48个北京淡色库蚊样本进行基因分型,42个样本检测结果与等位基因特异性PCR(AS-PCR)检测结果完全一致,得到SS(TTA/TTA)基因型21个,占50.0%,SR(TTA/TTT)基因型16个,占38.1%,RR(TTT/TTT)基因型5个,占11.9%,与测序结果完全一致;另外6个样本检测结果与AS-PCR检测结果不一致,测序显示:TCA(L1014S)、TTC(L1014F)突变各1株,另4株为敏感纯合子.因此,PCR SYBR GREEN 扩增灵敏度(93.75%)低于AS-PCR法(100%),但特异性较高,达100%;分析原因可能是被检测样本引物结合部位多态性较高,影响了引物的结合,而AS-PCR凭经验能完成部分结果的判断.综上所述,用PCR SYBR GREEN 扩增技术快速检测淡色库蚊的L1014F基因突变仍是一种值得采纳的等位基因分型方法.