人类免疫缺陷病毒假病毒检测系统的构建

• 作者: 严延生 吴守丽 王惠榕 谢美榕 颜苹苹
• 来源期刊: 中国病毒病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人类免疫缺陷病毒 感染性克隆 假病毒 荧光素酶
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 419-425
• 页数: 7页
• 分类号: R384
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人类免疫缺陷病毒(HIV)感染性克隆并在此基础上建立携带荧光素酶基因(Luc+)的HIV假病毒感染系统.方法 利用长片段PCR技术分别扩增福建省HIV分离株LWJ前后半长基因序列,以pCR-XL-TOPO为载体构建HIV感染性克隆pLWJ.将Luc+表达基因片段替换感染性克隆pLWJ中部分env区序列,从而构建出携带Luc+基因的报告基因病毒载体pLWJ-SV40-Luc+.将报告基因病毒载体和膜蛋白表达质粒VSV-G共转染293T细胞,获得携带Luc+基因的HIV假病毒.将HIV假病毒感染293T细胞,利用化学发光法检测感染细胞中Luc+相对荧光单位(RLU).结果 以HIV感染性克隆pLWJ为基础,构建出携带荧光素酶基因的VSV-G/H IV假病毒感染系统,其所产生的VSV-G/HIV假病毒仅有单轮感染活性,被感染细胞中报告基因的表达水平与加入病毒量呈剂量依赖性关系.结论 成功建立具有单轮感染活性的VSV-G/H IV假病毒检测系统,为开展HIV相关基础研究提供一个技术平台.