直接测序与克隆测序检测不育男性H19基因甲基化印记的比较

• 作者: 丁婷 余波澜 刘敏 周华 孙筱放 岳磊 袁静茹
• 来源期刊: 分子诊断与治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 男性不育 H19基因 甲基化印记 亚硫酸氢盐修饰后测序法 直接测序 克隆测序
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 249-254
• 分类号: R698.2
• 字数: 5532字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6929.2011.04.008

摘要

目的 建立亚硫酸氢盐修饰后测序技术,比较直接测序与克隆测序在不育男性精子印记基因DNA甲基化状态检测中的差别.方法 对样本进行精液分析和精子形态学分析,密度梯度离心法制备精液.提取精液基因组DNA并行亚硫酸氢盐处理,行半巢式PCR,将纯化后PCR产物与pCR 2.1-TOPO 载体连接及转化,分别对PCR产物及阳性克隆菌液进行测序.结果 PCR产物直接测序,前半部分序列丢失约40bp,1号CpG位点甲基化状态信息丢失.每例标本只有-个测序结果,会出现CpG位点的部分甲基化状态.挑取15个克隆进行测序,序列无丢失,18个CpG位点甲基化状态信息均完整.15个克隆CpG位点甲基化状态有所不同,显示出此样本的平均甲基化状态.结论 克隆测序不会造成序列丢失,CpG位点甲基化状态信息完整,克隆测序能较好地反应样本的平均甲基化状态.