3种亚群PCV-2感染性克隆的构建及体内外感染性

• 作者: 余兴龙 向卫军 李晶 李润成 李薇 王亚 白霞 罗维 葛猛
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2 感染性克隆 基因亚群 毒力
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产
• 页码范围: 68-72
• 分类号: S855.3
• 字数: 3237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1238.2011.00068

摘要

通过PCR扩增出猪圆环病毒2(PCV-2)3个亚群(1A、1B、1C)毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8(1A)、P0(1B)和P4-1(1C).将3个重组质粒分别用SacⅡ切出1767 bp的PCV-2全基因组,并在体外分别用T4连接酶连接而环化.用脂质体将3种自身环化的基因组转染无PCV-1污染的PK-15细胞,并按常规病毒培养方法分别传代,第5代细胞培养物分别用间接免疫荧光试验(IFA)及PCR方法检测转染的细胞,检测结果均为阳性,说明已获得PCV-2共3个亚群1A、1B、1C的感染性克隆.用1A、1B、1C感染性克隆的第5代细胞培养物分别接种小鼠,可在接种小鼠的血液中分别检测到相应PCV-2亚型的基因组DNA,表明本试验构建的自身环化的1A、1B、1C亚型的PCV-2的全基因组DNA在体内、体外均具有感染性.