应用反向线点杂交技术鉴定临床常见曲霉属和毛霉目真菌

• 作者: 万喆 李丽丽 李若瑜 王晓阳 赵作涛 陈伟
• 来源期刊: 中国真菌学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 曲霉 毛霉 PCR 反向线点杂交
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 261-266
• 分类号: R379.6|R379.9
• 字数: 4490字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-3827.2011.05.002

摘要

目的 应用反向线点杂交技术(reverse line blot hybridization,RLB)快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌.方法 收集我院真菌和真菌病研究中心保存的5种曲霉菌(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉)和7种毛霉目真菌(冻土毛霉菌、总状毛霉菌、卷枝毛霉菌、少根根霉、小孢根霉、微小根毛霉、伞状犁头霉),共计98株菌株.利用真菌通用引物ITS1和ITS4对菌株进行PCR扩增,用12个真菌种特异性探针与扩增后产物进行反向线点杂交.将RLB结果与真菌传统形态学鉴定结果、ITS区DNA测序结果进行比较.结果 RLB可以正确鉴定98株实验菌株,与形态学方法和ITS区测序方法鉴定结果100％一致,种特异性探针之间未见交叉杂交,显示出该方法的高度敏感性和特异性.8株阴性对照菌株(白念珠菌、茄病镰刀菌、尖端赛多孢、马尔尼菲青霉、疣状瓶霉、棒曲霉、日本曲霉以及雅致小克银汉霉),使用RLB方法无法鉴定.通过烟曲霉基因组DNA浓度10倍倍比稀释法验证RLB的敏感性为1.8×10-3 ng/μL.结论 RLB技术为实验室早期快速诊断、鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌提供参考.