计算机模建和点突变分析抗人CD40单克隆抗体5C11识别的抗原表位

• 作者: 张婷 张学光 瞿秋霞 章良
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD40 抗原表位 同源模建 点突变 肿瘤生物治疗
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 355-361
• 分类号: R392.1|R730.3|R318.04
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2011.04.003

摘要

目的:通过计算机模拟与点突变实验初步探讨本课题组前期研制的抗人CD40激发型单克隆抗体5C11识别的抗原表位.方法:利用InsightⅡ软件分别模拟抗原、抗体结构,构建抗原抗体复合物模型,通过计算推测5C11单抗所识别的抗原表位.构建人野生型CD40( wtCD40)及其第70位苏氨酸突变型(70muCD40)和第114位谷氨酸突变型(114muCD40)的重组真核表达载体pIRES2-EGFP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40,脂质体转染法将重组载体导入HEK293细胞,筛选稳定转染细胞株(即HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞).流式细胞术和Western blotting 检测5C11单抗与HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞的结合能力.结果:成功构建plRES2-EGFP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40真核表达载体和相应稳定转染细胞株.5C11单抗与HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞结合能力较HEK293/wtCD40细胞明显减弱；Western blotting检测结果表明,5C11单抗仅识别HEK293/wtCD40细胞,不识别HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞.结论:人CD40氨基酸序列的第70位苏氨酸和第114位谷氨酸是其单抗5C11识别的抗原表位,对构建人源化CD40抗体具有潜在的临床意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学光	苏州大学医学生物技术研究所	399	1957	18.0	24.0
4	张婷	苏州大学医学生物技术研究所	61	276	7.0	15.0
5	章良	苏州大学医学生物技术研究所	17	43	4.0	6.0
12	瞿秋霞		1	7	1.0	1.0