抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备和活性检测

• 作者: 刘娟妮 杨纯正 熊冬生 王金宏 范冬梅 许元富 邵晓枫 高灜岱
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 抗CD3ScFv蛋白 单克隆抗体 免疫亲和层析 Diabody[CD3×Pgp]
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 354-359
• 页数: 6页
• 分类号: R392.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-503X.2008.03.027

摘要

目的 制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体,用以抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测.方法 采用常规免疫学方法 制备抗抗CD3 ScFv单克隆体并制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体免疫亲和层析柱,用于抗CD3 ScFv蛋白和去除E-tag的Diabody [CD3×Pgp]的分离纯化.采用FACS法测定分别经抗抗CD3 ScFV抗体免疫亲和层析柱及抗E-tag亲和层析柱纯化的抗CD3 ScFv蛋白和Diabody [CD3×Pgp]对K562/A02和Jurkat细胞特异结合活性.采用间接ELISA法进行抗抗CD3 ScFv抗体特异性结合活性的检测 .结果 抗抗CD3 ScFV单克隆抗体能特异性地与抗CD3 ScFv蛋白结合而不与血清发生反应.经抗抗CD3 ScFV抗体免疫亲和层析柱和经抗E-tag亲和层析柱纯化后的抗CD3 ScFv蛋白均能与Jurkat细胞特异结合.经抗抗CD3 ScFV抗体免疫亲和层析柱纯化的去除E-tag的Diabody [CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合的阳性率分别为89.87%和83.95%;与其亲代抗体竞争结合K562/A02和Jurkat细胞后,结合率分别下降为56.30%和43.78%.结论 制备了抗抗CD3单克隆抗体和亲和层析柱,可用于抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测.