太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆与重组高效表达

• 作者: 丛丽娜 张欢 王丹 谢三群
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 无脊椎动物 太平洋牡蛎 i型溶菌酶 重组表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 127-132
• 分类号: Q78
• 字数: 4820字
• 语种: 中文

摘要

在双壳类软体动物牡蛎体内,溶菌酶(Lysozyme)在实现宿主免疫防御,破坏和消除侵入体内的病原中发挥着重要的作用.根据GenBank已有的太平洋牡蛎溶菌酶的全长cDNA序列(GenBank:AB179775),通过RT-PCR技术,从太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)中克隆得到溶菌酶(简称为CgLys)基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列.生物信息软件分析表明,其ORF为414 bp,编码137个氨基酸(aa),前20个aa为信号肽,成熟肽由117个aa组成,其分子量为13.2 kD.通过构建分子系统发育树对其同源性进行分析比较,初步推断该CgLys属于i型溶菌酶.将该CgLys基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-CgLys,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS.该基因工程菌经IPTG诱导发酵后,成功高效地表达了重组CgLys蛋白,其分子质量约为18 kD.该重组CgLya蛋白主要存在于细菌裂解液的上清液中,即以可溶性蛋白形式存在.上述结果将显著简化后续的蛋白纯化过程,为今后扩大规模生产牡蛎溶菌酶提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丹	大连工业大学生物工程学院	10	61	4.0	7.0
2	丛丽娜	大连工业大学生物工程学院	57	255	8.0	14.0
3	谢三群	大连工业大学生物工程学院	5	20	3.0	4.0
4	张欢	大连工业大学生物工程学院	7	28	4.0	5.0