高分辨率熔解曲线法检测CYP4A118590T＞C单核苷酸多态性

• 作者: 刘俊花 朱悦伟 石磊 贺宝霞 赵树进
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 高分辨率熔解曲线 正交试验 单核苷酸多态性
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 501-505
• 分类号: R34
• 字数: 3503字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.06.007

摘要

目的 建立CYP4A11 8590T＞C单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)检测方法.方法先采用温度梯度PCR,确定适宜的退火温度;再利用正交试验,优化引物、DNA模板量和Mg2+量,最终确定PCR反应体系和反应条件.通过对607例无血缘关系的受试者基因组DNA进行HRM分析,并随机选择50例产物测序.结果 引物最适退火温度为57.8 ℃;PCR最佳反应体系为20 μl,包括2×conc dNTP mix 10 μl,上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μl,DNA溶液(30 ng/μl)1.0 μl,Mg2+(2.5 mmol/L)1.5 μl和灭菌水6.5 μl.607例受试者中CYP4A11 8590TT、TC和CC基因型频率分别为54.7 %、37.6 %和7.7 %.结论该正交试验优化的HRM技术可用于检测CYP4A11 8590T＞C单核苷酸多态性,且其分析结果和测序结果一致.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵树进	广州军区广州总医院药学部	271	2349	23.0	37.0
2	石磊	广州军区广州总医院药学部	90	460	12.0	16.0
3	刘俊花	南方医科大学药学院	3	12	2.0	3.0
5	贺宝霞	广州军区广州总医院药学部	9	42	5.0	6.0
8	朱悦伟	南方医科大学药学院	1	2	1.0	1.0