梅毒螺旋体外膜蛋白Tp0136的制备及在血清学诊断中的应用

• 作者: 何君梅 富梦楚 李婷婷 杨珺 沈琳 王磊阳 陈政卓
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 梅毒螺旋体 Tp0136 重组 纯化 免疫活性 早期梅毒诊断
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1045-1047,1053
• 页数: 4页
• 分类号: R759.1
• 语种: 中文

摘要

目的:为探索梅毒螺旋体(Treponema Pallidum,Tp)外膜蛋白Tp0136在早期梅毒诊断中的价值,利用基因重组技术制备Tp0136蛋白,用于血清抗体的检测.方法:采用PCR扩增Tp0136基因,构建不含信号肽序列的Tp0136基因原核表达载体,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,镍离子亲和凝胶分子筛二步法纯化目的蛋白,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以rTp0136为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体.结果:重组工程菌包涵体形式表达相对分子质量约为46 KDa的rTp0136,表达率为15%,制备得到纯度大于98%的rTp0136.纯化的rTp0136能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1:32.Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为75.1%.结论:重组Tp0136具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景.