双抗体夹心ELISA法检测嗜酸性粒细胞阳离子蛋白

• 作者: 李会强 李桂珍 王学谦 赵俊芳
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 酶联免疫吸附试验 过敏性疾病
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 336-338
• 页数: 3页
• 分类号: R446.6
• 语种: 中文

摘要

目的 制备嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophilia cationic protein,ECP)双抗体夹心ELISA法检测试剂盒.方法 葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化抗ECP单克隆抗体,过碘酸钠法进行抗ECP多克隆抗体HRP标记,制备ELISA试剂盒,进行条件优化和实验效能评价,检测过敏性皮肤病患者ECP水平.结果 通过对各种反应条件的优化,确定了最适工作条件:单抗最适包被浓度为1:500稀释,酶标多抗最适浓度为1:8000稀释,最适血清稀释液为稀释液Ⅱ(0.01 mol/L PBS,0.1％ Tween 20,0.1％溴化十六烷基三甲基铵,2.0 g/L小牛血清清蛋白,20 mmol/L乙二胺四乙酸),最佳反应时间为60 min,反应温度为37℃；本研究制备的试剂盒线性范围为2.5 ～ 200 ng/mL,灵敏度为2.75 ng/mL,相对偏差为11.5％,批内变异系数(CV)＜10％,批间CV＜ 15％,与美国ADL试剂盒比较相关系数(r)为0.97,本试剂盒天津地区居民的正常参考值为(9.0±3.7)ng/mL.过敏性皮肤病患者ECP水平与健康人差异具统计学意义.结论 该双抗体夹心ELISA检测ECP试剂盒具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点,可在临床上广泛应用,为过敏性疾病的诊治提供依据.