人血清白蛋白与促红细胞生成素融合蛋白的构建及表达

• 作者: 吴洽庆 李德华 苟兴华 赵兰英 韩蕾 黄迎春
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 血清白蛋白 促红细胞生成素 融合蛋白 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 317-321
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 构建重组人血清白蛋白促红细胞生成素融合蛋白(HAS-EPO)表达载体,用CHO细胞表达该重组蛋白.方法 PCR扩增出人血清白蛋白基因(HAS)和促红细胞生成素基因(EPO);合成编码多肽GS (GGGGS)3的DNA片段作为接头(Linker),采用重叠PCR的方法将Linker与EPO基因拼接成LEPO基因.HAS与LEPO基因通过BamH I酶切位点相连成HAS-EPO融合基因;将该融合基因插入表达载体pCI-neo构建为表达质粒pCI-HLE.脂质体转染CHO细胞,以G418抗性筛选转染细胞.用PCR及Western blot方法鉴定被转染CHO细胞,以ELISA方法检测被转染CHO细胞表达情况.结果 酶切及测序结果证实pCI-HLE构建成功.PCR检测表明融合基因已转入CHO细胞;Western blot结果表明融合基因成功表达,并具有EPO免疫原性.ELISA测活显示融合蛋白体外活性在86～637 IU/(mL·106·72 h)之间.结论 pCI-HLE真核表达载体可以在CHO细胞中成功表达具有EPO免疫原性的HAS-EPO融合蛋白,为开发长效EPO奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李德华		24	117	6.0	8.0
2	苟兴华		23	119	6.0	8.0
3	韩蕾		22	112	6.0	8.0
4	赵兰英		15	65	5.0	6.0
5	吴洽庆		12	85	3.0	9.0
6	黄迎春	四川大学华西医院移植免疫重点实验室	4	17	3.0	4.0