固定金属亲和层析法纯化重组Kringle5蛋白工艺的建立

• 作者: 张悦红 牛勃 解军 陈显久
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Kringle 5蛋白 固定金属亲和层析 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1101-1104
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立固定金属亲和层析法(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化重组Kringle 5蛋白的工艺,为Kringle5蛋白的制备及生物学活性研究奠定基础.方法 常规制备IMAC蛋白上样样品,分别采用pH梯度洗脱和咪唑梯度洗脱的方法获取Krinoe 5蛋白洗脱液,分段收集洗脱样品,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western blot鉴定其反应原性.结果 咪唑梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度达98%以上,得率为21.3 mg/柱体积,但不能充分将Kringle 5蛋白与杂蛋白分离；pH梯度洗脱法获得的Kringle5蛋白纯度在98%以上,得率为62.7 mg/柱体积,且可与杂蛋白充分分离.结论 已建立了重组Kringle 5蛋白的纯化方法,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定了基础.