家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒

• 作者: 何永强 吴姗 帅江冰 张弘 张晓峰 徐国群 李光才 王素华 董强 邱海洪 鲁兴萌
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕微孢子虫 荧光定量PCR 诊断试剂盒
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 260-265
• 分类号: S884.2+1
• 字数: 5496字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2011.02.012

摘要

基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫的方法,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66bp片段作为靶标,设计特异性引物和TaqMan探针,用构建的重组质粒制备标准品进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测定线性范围,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,成功构建了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法,并研制出诊断试剂盒.该方法的检测线性范围为1×108~1×102拷贝/mL的7个线性梯度,检测家蚕微孢子虫的敏感度迭1×102拷贝/mL,特异性高,3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6%~7.2%,批间变异系数为5.2%~7.8%.结果表明,建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点.