人脐带间充质干细胞分离扩增方法的优化

• 作者: 刘剑戎 张琪 张英才 杨卿 杨扬 潘国政 陈规划
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 间充质干细胞 脐带 细胞分离
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 818-823
• 分类号: R318.14
• 字数: 3231字
• 语种: 中文

摘要

[目的]探讨一种高效稳定分离和扩增人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)的方法.[方法]取脐带20条,获得Wharton's Jelly组织,分别用酶联合消化法(12例)和酶序贯消化法(8例)来分离、提取hUC-MSC,比较两种方法分离hUC -MSC的成功率、原代培养时间及获得的细胞数量；利用低糖DMEM (LG-DMEM)完全培养基和LD-Mesen培养基(MesenPro RSTM与LG-DMEM的混合培养基)分别培养hUC-MSC,比较两种培养体系的扩增效率.对所获取细胞的免疫表型以流式细胞术进行鉴定,并诱导成脂、成骨分化验证其多向分化潜能.[结果]酶联合消化法和酶序贯消化法成功率分别为100％(12/12)和12.5％(1/8),两者相比有显著统计学差异(P=1.03×10-4),前者原代培养平均时间为(14.17±1.14)d,获得细胞(1.30±0.14)× 106个.2×105个hUC-MSC用LD-Mesen和LG-DMEM两种体系培养12d后,扩增所得的细胞数分别为(14.86±0.08)×106和(5.08±0.08)×106,两者有显著统计学差异(P=1.38×10-8).hUC-MSC高表达CD73、CD105、CD90、CD29、CD44,不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR;并可向成骨细胞及脂肪细胞诱导分化.[结论]酶联合消化Wharton's Jelly组织并以LD-Mesen体系进行扩增可高效获取hUC-MSC,效率明显优于传统方法.