survivin shRNA表达质粒对GBC-SD细胞生长的抑制及对化疗敏感性的影响

• 作者: 张少炎 楼朝阳 沈汉斌 胡松 蔡晓棠
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胆囊肿瘤 RNA干扰 survivin 短发夹环RNA 胆囊癌细胞
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 154-158
• 分类号: R735.8
• 语种: 中文

摘要

目的 构建针对survivin基因的shRNA真核表达载体,观察重组质粒pEGFP-survivin对胆囊癌细胞(GBC-SD)化疗敏感性的影响.方法 设计、合成包含BbsI酶切位点的针对survivin的shRNA,与BbsI酶切后真核表达载体pEGFP-H1连接,将其定向克隆至H1启动子下,构建成重组载体pEGFP-survivin;采用脂质体法将pEGFP-H1和重组质粒导入GBC-SD细胞中;用G418对转染的细胞进行稳定筛选.用RT-PCR测各组细胞中survivin mRNA的表达;以合适浓度的顺铂(DDP)(3.0 μg/mL)作用相同时间后,用MTT法检测GBC-SD,GBC-SD/EGFP,GBC-SD/survivin 3种细胞存活率,TUNEL法观察细胞调亡.结果 pEGFP-survivin成功构建.GBC-SD/survivin细胞中的survivin表达水平较其余2种细胞明显下降(分别下降74.7%和71.5%);经DDP作用后,GBC-SD/survivin细胞存活率较其他2组明显降低,3种细胞均可见棕色凋亡细胞核.结论 成功构建了针对survivin基因的shRNA真核表达载体,并获得稳定表达survivin shRNA的细胞株GBC-SD/survivin.survivin shRNA能明显降低GBC-SD细胞中survivin的表达,提高其对化疗药物的敏感性.