可转化人工染色体(TAC)文库载体DNA的制备

• 作者: 李克秀 李晓玲 董英山 赵洪锟 赵茂林
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 可转化人工染色体(TAC) 文库载体 酶切 脱磷
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 199-204
• 分类号: Q523
• 字数: 4929字
• 语种: 中文

摘要

对可转化人工染色体(TAC)pYLTAC747NH/sacB文库载体DNA的制备条件进行了较系统的模索和研究.结果表明,该文库载体经碱裂解法提取、QIAGEN Plasmid Mini kit纯化后,可获得较纯净的载体DNA.对其闭环载体DNA分别用不同酶量的Hinid Ⅲ酶切处理,经琼脂糖凝胶电泳检测得出其最佳Hind Ⅲ完全酶切条件为2 U Hind Ⅲ/μg闭环载体DNA、37℃酶切30 min;分别用0.5 MBU和1 MBU HK脱磷酶/μg对其线性载体DNA进行脱磷处理,经电泳和载体自连产物电转化检测表明其适宜的完全脱磷条件为1 MBU HK脱磷酶/μg线性载体DNA,30℃脱磷1 h；将所制备的线性载体DNA与λ DNA/Hind Ⅲ酶切片段进行连接,连接产物转化频率较高,其电转化大肠杆菌DH10B感受态细胞频率可达到9.6×10s.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓玲	吉林省农业科学院生物技术研究中心	19	145	7.0	11.0
3	赵洪锟	吉林省农业科学院生物技术研究中心	34	230	7.0	14.0
4	董英山	吉林省农业科学院生物技术研究中心	58	417	11.0	18.0
7	李克秀	长春工业大学化学与生命科学学院	4	15	2.0	3.0
8	赵茂林	中国科学院遗传与发育生物学研究所	1	0	0.0	0.0