以小麦根尖分生组织细胞核及染色体制备高分子量DNA

• 作者: 佘茂云 徐兆师 李连城 郭东伟 陈明 陈耀峰 马有志
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 高分子量DNA 蔗糖密度梯度离心 细胞周期同步化 染色体流式分选 BAC
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1920-1923
• 页数: 4页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0496-3490.2006.12.025

摘要

为了克服以叶片为材提取HMW DNA的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法.该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材料,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体,经去蛋白、酶切、透析,获得HMW DNA.经检测,来自200条根尖(10个胶块)的HMW DNA的浓度约为4～20 ng/μL,而连接、转化后的BAC克隆平均插入片段超过100 kb.证明该法适用于提取HMW DNA以构建BAC文库.