利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化

• 作者: 刘月光 史新娥 杨公社 杨秋梅 沈清武 袁媛 陈宗正 高晓娟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 骨骼肌纤维 卫星细胞 Pax7 猪
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 856-863
• 分类号: S828
• 字数: 6363字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.05.011

摘要

建立单根肌纤维法体外培养猪骨骼肌卫星细胞的体系,了解其增殖和成肌特性.通过Ⅰ型胶原酶消化,从猪骨骼肌中分离完整的单根肌纤维并培养,用细胞免疫荧光鉴定肌纤维上的卫星细胞,随后对从单根肌纤维上游离出来的卫星细胞进行细胞免疫荧光染色,传代培养,成肌诱导分化和Western blot分析骨骼肌卫星细胞成肌特异性蛋白的表达.结果显示:分离并培养的单根肌纤维上附着有卵圆形的细胞,并随时间的推移,细胞缓慢向外迁移并增殖,卫星细胞特异性标志基因对盒转录因子(Paired protein box,Pax7)和成肌分化抗原(Myogenic Differentiation Antigen,MyoD)免疫荧光染色呈阳性,且阳性率达到90％以上.成肌诱导分化后,细胞开始汇合,并呈方向性生长,最终形成多核肌管,且成肌特异性标志基因Myogenin和myosin heavy chain(MyHC)表达呈阳性.MyoD蛋白高表达于增殖期,而Myogenin和MyHC在进入分化期才表达.该实验成功建立了猪骨骼肌单根肌纤维的体外培养方法并获得了高纯度的卫星细胞,为骨骼肌卫星细胞进行活体移植治疗相关疾病研究提供了实验材料.