磁珠分离纯化技术在实时荧光定量PCR检测HBV DNA中的应用

• 作者: 岑丽莲 李成德 李海珠 梁梅芳 梁洁玲 陈金强 陈雄毅 黄晓佳 黄玉环
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 磁珠分离纯化技术 乙型肝炎病毒 脱氧核糖核酸 实时荧光PCR
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 68-71
• 分类号: R512.62|Q503
• 字数: 4198字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2011.03.024

摘要

目的 评价磁珠分离纯化技术(简称磁珠法)提取核酸的重复性、提取效率一致性、线性范围、灵敏度及抗干扰性,初步探讨其在实时荧光定量PCR检测HBV DNA中的应用价值.方法 采用磁珠法提取HBV DNA log值分别为4.16,5.23和7.04的质控血清进行重复性试验,HBV DNA阳性血清10倍梯度稀释的系列标本评价其提取效率一致性,HBV DNA强阳性血清作10倍系列稀释后检测其线性范围,HBV DNA标准血清与含干扰成分(溶血、黄疸和脂血)的HBV DNA 阴性血清,按4∶0,3∶1,2∶2,1∶3和0∶4比例分别混合成5个不同浓度标本用于干扰试验.以提取方法为沉淀煮沸法的PCR 荧光诊断试剂作对照,应用磁珠法及配套扩增试剂检测288份乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,并比较测定结果.结果 磁珠法批内和批间平均变异系数分别为3.66%和4.75%;HBV DNA含量不同的血清提取效率均在98%以上;在1.28×102IU/L～1.28×109IU/L之间有良好的线性关系;最低检出限为60.5 IU/L;不同浓度的黄疸和脂血对扩增曲线和实验结果无明显影响;血清中血红蛋白浓度至50 g/L时,HBV DNA结果相差约0.5～1.0个数量级.磁珠法和沉淀煮沸法的阳性率分别为88.19%和82.64%.当沉淀煮沸法检测结果log值处在2.699～4.000之间时,两法检测相应标本结果差异有统计学意义.结论 磁珠法高效、快速和易于自动化,应用于HBV DNA检测对乙型肝炎患者的临床诊断和疗效监测将有十分重要的意义.