亲水作用色谱法测定组织中全基因组DNA甲基化水平

• 作者: 刘春安 张俊杰 张立坚 张良滔 蔡春
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 亲水作用色谱 全基因组DNA甲基化 组织 结肠癌
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 特别策划:色谱技术在生化检验中的应用
• 页码范围: 342-345
• 分类号: O658
• 字数: 2634字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2011.00342

摘要

建立了亲水作用色谱(HILIC)测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法.采用苯酚-氯仿提取组织中的DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,经N2吹干后,加乙腈-水(9:1,v/v)溶解,用Waters BEH HILIC柱进行分离,在277 nn波长下检测胞嘧啶(Cyt)及5-甲基胞嘧啶(5-mCyt)含量.结果表明,以乙腈-10 mmol/L甲酸铵溶液(94:6,v/v)为流动相,流速为0.5 mL/min,Cyt与5-mCyt分离较好,保留时间分别为2.6与3.1min.胞嘧啶的线性范围为1～900 μmol/L,相关系数为0.999 9;5-甲基胞嘧啶的线性范围为1～64 μmol/L,相关系数为0.999 8.胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为54 nmol/L(柱中为0.54 pmol),定量限为250 nmol/L(柱中为2.5 pmol);在5～900 μmol/L的添加水平下,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的平均加标回收率为94.7%～100.5%,相对标准偏差小于1.48%.用该方法检测了结肠癌组织中DNA甲基化水平,结果显示该癌组织中全基因组的DNA甲基化均值为4.0%.该方法快速、简单,稳定性好,灵敏度较高,能满足全基因组DNA甲基化的检测要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘春安		32	167	7.0	12.0
2	张立坚		45	364	11.0	17.0
3	张俊杰		7	44	3.0	6.0
4	张良滔		6	30	3.0	5.0
5	蔡春		55	301	10.0	13.0