人乳头瘤病毒6b型L1基因的克隆及表达

• 作者: FAN Hong-tao LIU Jie 林泽 殷董 田静 胡云峰 计雄飞 赵永铿 邓列华 郭秀枝
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒6 绿色荧光蛋白类 转染 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 235-236,240
• 分类号: R373
• 语种: 中文

摘要

目的 研究尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒(HPV)6b型晚期基因L1(HPV6bL1)在真核细胞内的表达.方法 PCR技术扩增原核重组质粒PQE40-HPV6bL1中L1基因,酶切后与真核表达质粒PEGFP-C1连接,转化人感受态大肠埃希菌DH5α,经扩增后酶切鉴定,挑选阳性克隆进行测序.以重组质粒PEGFP-HPV6bL1转染COS-7细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的表达,RT-PCR检测HPV6bL1 mRNA的表达.结果 双酶切及测序鉴定显示,重组质粒中插入的目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均正确,PEGFP-HPV6bL1构建成功.重组体成功转染进COS-7细胞,在荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测到HPV6bL1 mRNA的表达.结论 建立了HPV6bL1绿色荧光真核表达系统,为研究该蛋白质的功能莫定了基础.