转Vip3Aa基因的球孢白僵菌工程菌的构建及其对马尾松毛虫毒力的增效作用

• 作者: 任小芳 刘振邦 朱虹 李增智 黄勃
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 球孢白僵菌 苏云金杆菌 Vip3Aa基因 载体构建 芽生孢子转化 基因工程
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 736-741
• 分类号: S476.12
• 语种: 中文
• DOI: 34-1162/s.20110829.1430.013

摘要

根据苏云金杆菌营养期杀虫蛋白基因Vip3Aa序列设计全基因扩增引物,并在引物两端添加合适的酶切位点进行PCR扩增,纯化的PCR产物和载体pbarGPE1分别经Xho I和EcoR I双酶切、连接,构建真菌表达载体pbarGPE1-vip3Aa.将构建好的质粒经Sea I酶切线性化后,利用芽生孢子转化法转入昆虫病原真菌球孢白僵菌Bb13菌株内,得到白僵菌工程菌株Bb13V.RT-PCR结果证明Vip3Aa在工程菌株中已得到成功转录.在室内恒温25℃条件下,用喂食、喷雾以及两者相结合的方法,分别测定1×105、1×106、1×107、1×108和2× 108孢子·mL-1 5个不同孢子浓度下原始菌株和工程菌株对二龄马尾松毛虫的毒力.结果表明,在前4种不同浓度的处理条件下,采取3种不同的处理方式,工程菌株均比喷雾处理的原始菌株致死率提高30％以上；喷雾处理的毒力提高33.6～62.1倍；喂食处理的致死率均高于喷雾处理.在1×108孢子·mL-1浓度下,喂食处理的致死率显著高于喷雾处理,致死中时缩短6.89 d.因此,Vip3Aa基因在转入白僵菌后得到了表达,从而赋予白僵菌可观的胃毒作用,使得工程菌对松毛虫的毒力明显增强.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李增智	安徽农业大学微生物防治省重点实验室	186	3365	29.0	45.0
2	黄勃	安徽农业大学微生物防治省重点实验室	100	1053	19.0	26.0
3	朱虹	安徽农业大学微生物防治省重点实验室	21	135	7.0	10.0
4	刘振邦	安徽农业大学微生物防治省重点实验室	5	35	3.0	5.0
5	任小芳	安徽农业大学微生物防治省重点实验室	2	6	2.0	2.0