复方血栓通对人视网膜血管内皮细胞抗氧化损伤的保护作用及其机制

• 作者: 唐仕波 朱晓波 李建桥 李涛 罗燕 肖伟 陈晓云 黄娟
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 复方血栓通 视网膜血管内皮细胞 氧化损伤 核转录因子-KB 凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 872-878
• 分类号: R774.03
• 字数: 8289字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2011.10.003

摘要

背景 氧化损伤是引起内皮细胞功能障碍和细胞死亡的重要因素之一,它还可导致视网膜血管性疾病的发生.复方血栓通对多种视网膜血管性疾病有一定的疗效,但分子机制尚不明确.目的 研究复方血栓通对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人视网膜血管内皮细胞(RVECs)氧化损伤的保护作用及其机制.方法 分离健康人供体眼的视网膜,用组织块培养法进行人RVECs的原代培养,并用FITC-vWF染色流式细胞仪对培养细胞进行鉴定.取3～5代的细胞用于实验,在含有5×104个/L细胞密度的培养孔中分别加入质量浓度为0.0625、0.1250、0.2500、0.5000、1.000 g/L复方血栓通溶液,各质量浓度复方血栓通组和t-BHP模型组均加入终浓度为100μmol/L t-BHP,干预24 h后用MTT法检测各组人RVECs的吸光度(A490)值以评估复方血栓通的细胞毒性.t-BHP模型组分别加入终浓度为75、100、200和300 μmol/L的t-BHP,相应的复方血栓通组在不同浓度t-BHP造成细胞氧化损伤的同时均加入终质量浓度为0.2500 g/L复方血栓通溶液,干预6h后,用MTT法检测复方血栓通对t-BHP引起氧化损伤的作用.用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测各组细胞的凋亡和坏死率；用倒置显微镜和Hoechst33258细胞核染色观察各组细胞的形态学,利用免疫荧光法检测人RVECs中蛋白氧化损伤和DNA氧化损伤的生物标记物硝基酪氨酸(NT)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的表达；Western blot法检测t-BHP损伤6、12、24 h各组细胞核转录因子-KB(NF-KB)、p53、bcl-2和bax的蛋白表达水平.结果正常对照组、0.0625、0.1250、0.2500、0.5000、1.000 g/L复方血栓通组人RVECs的A490值总体比较差异无统计学意义(F=1.989,P＞0.05),75、100、200和300 μmol/L的t-BHP作用后细胞存活率下降,而相应的复方血栓通组细胞存活率均较t-BHP模型组升高,差异均有统计学意义(t=14.57、13.82、21.51、32.64,P＜0.05).分别用75、100、200、300 μmol/L t-BHP干预6h后细胞凋亡率和细胞坏死率升高,而细胞正常率均明显低于相应的复方血栓通组,差异均有统计学意义(t=14.908、5.495、17.165、26.330,P＜0.01).t-BHP模型组随着t-BHP浓度的增加,变形和死亡的人RVECs数目增加,但复方血栓通组细胞形态无明显变化,死亡细胞数减少.与相应的t-BHP模型组相比,不同质量浓度的复方血栓通组人RVECs中NT及8-OHdG的表达明显减少,NF-KB、p53和bax蛋白的表达水平明显降低,而bcl-2蛋白的表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 复方血栓通可保护人RVECs免受t-BHP诱导的氧化损伤,其机制可能是通过下调细胞中NF-KB、p53和bax蛋白的表达并上调bcl-2蛋白的表达.