分子伴侣BiP结构域分析及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 刘艳娜 周菩华 李祥柱 赵文君 郭风劲
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: BiP 缺失体 生物信息学 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1204-1212
• 页数: 9页
• 语种: 中文

摘要

结合免疫球蛋白(binding immunoglobulin protein,BiP),是Hsp70 (70 kilodalton heat shock proteins)蛋白家族的成员之一,是内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)主要的调节器.为了研究BiP的分子结构与生物学功能的关系,首先,分析BiP的DNA序列和蛋白质空间构象,接着利用重叠PCR方法分别克隆ATPase结构域缺失体和peptide-binding结构域缺失体(BiPa和BiPp),成功构建带myc标签的真核表达载体,转染LO2细胞和SMMC-7721细胞,应用免疫印迹方法检测其在细胞内的表达；运用MTT法、BrdU免疫组化法及流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡:检测BiP及两个组成结构域对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.酶切、电泳和DNA测序结果显示,BiP全长和两个缺失体的真核表达载体构建成功:免疫印迹检测到BiP三种真核载体在LO2细胞和SMMC-7721细胞中均能正确表达；MTT和BrdU免疫组化结果表明,BiP全长和缺失体BiPa、BiPp三种真核载体均能有效促进SMMC-7721的增殖,各组间细胞增殖率结果分析提示ATPase功能域可能抑制细胞增殖,而peptide-binding结构域可能促进细胞的增殖；流式细胞仪结果显示,转染BiP、BiPa、BiPp三种真核载体均可以促进SMMC-7721的凋亡,缺失体BiPa与全长BiP组间凋亡率差异不显著；而缺失体BiPp组细胞凋亡率明显低于全长BiP组,两组差异具有显著性(P＜0.05)；提示ATPase功能域与细胞凋亡可能不相关,而peptide-binding结构域可能促进细胞的凋亡.上述结果表明,BiP的两个组成结构域:ATPase功能域与peptide-binding结构域,独立存在或者共同存在时,调控细胞增殖与凋亡具有差异性；当两个结构域共同存在时,它们会协同调控细胞的增殖与凋亡,具体的分子机制还需要进一步的实验研究和探讨.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭风劲		36	142	7.0	11.0
2	李祥柱		5	24	2.0	4.0
3	赵文君		5	24	2.0	4.0
4	刘艳娜		2	8	1.0	2.0
5	周菩华		1	0	0.0	0.0