人caspase-1基因在肝癌细胞中的表达及对IL-1β水平的影响

• 作者: 李青春 林志娟 梁淑娟 王雪净 肖伟玲
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: caspase-1 肝癌细胞 IL-1β 炎症
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 29-33
• 分类号: R392.11
• 字数: 4411字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.01.007

摘要

目的:将人caspase-1基因真核表达载体转染肝癌细胞后观察其表达水平及对IL-1β水平的影响,为研究caspase-1与IL-1β的关系及其在慢性炎症与肿瘤中的作用提供依据.方法:利用阳离子聚合物(jetPEI)将pIRES2-EGFP-caspase-1重组表达载体和pIRES2-EGFP对照载体转染人肝癌细胞HepG2(HepG2/caspase-1、HepG2/mock),48小时后倒置相差荧光显微镜下观察表达情况,利用RT-PCR、Western blot方法检测两组细胞caspase-1表达水平,采用caspase-1底物显色分析研究的方法检测两组细胞中caspase-1的活性.夹心ELISA法检测细胞培养上清以及细胞裂解液中IL-1β的表达水平.结果:转染48小时后倒置相差显微镜下可见,pIRES2-EGFP-caspase-1和pIRES2-EGFP重组表达载体均能在HepG2细胞中高效表达;HepG2/caspase-1细胞中caspase-1 mRNA表达水平显著提高;经LPS刺激后,HepG2/caspase-1细胞中caspase-1总蛋白的水平明显升高;caspase-1的生物活性水平与对照组相比具有显著性差异(t=25.679,P＜0.05);HepG2/caspase-1细胞培养上清中IL-1β的水平明显高于HepG2/mock组细胞(t=3.417,P＜0.05),胞浆裂解液中的变化相对不显著(t=2.396,P＞0.05).结论:人caspase-1基因真核表达载体pIRES2-EGFP-caspase-1能够在肝癌细胞中高效表达caspase-1,且该重组表达载体在HepG2细胞中能提高活性IL-1β的表达.