BGC-823细胞中慢病毒途径针对HIF-1α基因的RNAi实验

• 作者: 孟先泽 张慈安 张璇 武峰 毛竹君 赵圣佳 赵婧 陆烨 魏品康
• 来源期刊: 江西科学
• 关键词: HIF-1α 慢病毒 RNAi BGC-823
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 329-334
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-3679.2011.03.011

摘要

目的:构建人HIF-1α基因的shRNA慢病毒载体、包装生产重组慢病毒颗粒,病毒途径高效感染胃癌细胞株BGC-823,并验证基因沉默效率.方法:在NCBI数据查找人HIF-1α基因序列,然后使用siRNA在线设计软件,设计针对基因CDS区的3条siRNA序列及Negative序列.根据设计好的siRNA序列设计双链互补的shRNA-Oligo DNA,退火形成双链后与线性化载体链接,构建shRNA重组表达载体.经由293TN细胞包装shRNA重组慢病毒颗粒,随后使用重组病毒感染BGC-823,通过荧光标记蛋白GFP确定感染效率后收集细胞样本,分别采用Real-time PCR和Westem blot方法检测靶基因在mRNA和蛋白质水平的沉默效率.结果:shRNA重组表达载体测序结果与设计序列完全一致,包装病毒后滴度达到1×104ifu/μL.慢病毒感染BGC-823细胞取得了极高的基因转导效率.mRNA检测结果显示,siRNA3对于对与目的基因的沉默效果最好,较阴性对照序列组相比较,mRNA的表达量下降了92％,Westem blot检测的结果与mRNA检测结果完全相符合.结论:通过慢病毒途径,可以在BGC-823细胞中高效的进行HIF-1α基因的沉默.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏品康	上海长征医院中医科	51	514	11.0	21.0
2	陆烨	上海长征医院中医科	12	59	5.0	7.0
3	张璇	上海长征医院中医科	10	45	5.0	6.0
4	毛竹君	上海长征医院中医科	1	1	1.0	1.0
5	武峰	上海长征医院中医科	1	1	1.0	1.0
6	张慈安	上海长征医院中医科	1	1	1.0	1.0
7	孟先泽	上海长征医院中医科	1	1	1.0	1.0
8	赵婧	上海长征医院中医科	3	1	1.0	1.0
9	赵圣佳	上海长征医院中医科	1	1	1.0	1.0