luxAB发光基因标记的铜绿假单胞菌株的构建

• 作者: 刘红艳 李闻 黄正
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 医学
• 关键词: luxAB基因 铜绿假单胞菌 接合转移 二亲本杂交 生物检测
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 57-60
• 分类号: Q78|R117
• 语种: 中文

摘要

目的 构建表达luxAB发光基因的铜绿假单胞基因工程菌.方法 用BglⅡ酶切pUC-luxAB质粒,回收luxAB片段与BamH Ⅰ酶切的质粒载体pBBRIMCS-5连接形成重组质粒pBBR-luxAB,再转化E.coli DH5α感受态细胞,经庆大霉素抗性、氯霉素抗性、发光检测多重筛选舍有pBBR-luxAB重组质粒的的阳性克隆,并设立对照菌株.抽提pBBR-luxAB质粒、酶切、凝胶电泳,验证质粒构建的正确性.通过二亲本杂交方式将pBBR-luxAB质粒导入铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),构建基因工程菌铜绿假单胞菌(pBBR-luxAB)并对其进行质粒传代稳定性、发光动力学曲线以及发光度和活菌数关系进行测定.结果 成功构建pBBR-luxAB重组质粒并且确定其成功转入铜绿假单胞菌中,连续转接4次后质粒保持率仍可达93%.在加入底物20min后,重组菌发光强度趋于稳定水平(1.32mV/m1),其发光强度与活菌量呈显著正相关(r=0.96,P＜0.05).结论 该研究成功构建luxAB发光基因标记的铜绿假单胞菌(pBBR-luxAB).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄正	华中科技大学同济医学院公共卫生学院教育部环境与健康重点实验室	25	334	7.0	18.0
2	刘红艳	华中科技大学同济医学院公共卫生学院教育部环境与健康重点实验室	33	285	7.0	16.0
3	李闻		6	17	2.0	3.0