CREG基因沉默诱导小鼠ESCs来源的EBs自发性凋亡

• 作者: 张娜 彭程飞 李杰 田孝祥 闫承慧 韩雅玲
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: EIA激活基因细胞阻遏子 胚胎干细胞 细胞凋亡 胚胎小体
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1574-1579
• 分类号: R363
• 字数: 3697字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.08.022

摘要

目的:探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)基因沉默诱导鼠源性胚胎干细胞(ESCs)来源的胚胎小体(EBs)自发性凋亡的作用.方法:应用pDS-shRNA- CREG逆转录病毒真核表达载体和绿色荧光蛋白(GFP)的对照载体,感染鼠源性胚胎干细胞R1,筛选获得稳定的细胞克隆(R1-shCREG和R1-GFP);用小鼠胚胎成纤维细胞株STO作为饲养细胞,进行R1、R1-shCREG和R1-GFP细胞培养.倒置显微镜观察3种ESCs的生长情况.碱性磷酸酶(AKP)染色和小鼠心肌接种畸胎瘤形成实验检测转染后ESCs分化情况.当ESCs生长至亚融合状态时进行传代,去除白血病抑制因子(LIF)并悬浮培养制备EBs.用RT-PCR技术和Western blotting方法分别检测3组EBs培养7 d时CREG和cleaved caspase-3蛋白和mRNA的表达,Annexin V/PI流式细胞术检测EBs细胞凋亡情况.结果:经pDS-shRNA-CREG逆转录病毒真核表达载体及 GFP的质粒载体转染获得稳定转染的细胞克隆.AKP染色证实R1、R1-GFP和R1-shCREG 3组ESCs均保持未分化状态.同时,体内和体外分化研究证实,R1和R1-GFP组细胞具有三胚层分化能力,小鼠心肌内注射的ESCs形成畸胎瘤组织;而R1-shCREG则不能够形成畸胎瘤类似物,细胞分化能力降低,且细胞死亡现象增加.培养7 d的R1-shCREG/EB组 CREG蛋白表达量较R1/EB组和R1-GFP/EB组均降低;CREG的mRNA表达下降;而cleaved caspase-3 mRNA和蛋白表达均显著升高;同时,R1-shCREG/EB细胞凋亡率明显升高.结论:下调CREG表达可抑制ESCs分化,促进ESCs来源的EBs细胞凋亡的发生.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩雅玲	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	746	3758	26.0	37.0
2	闫承慧	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	84	276	9.0	14.0
3	张娜	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	8	17	2.0	4.0
4	田孝祥	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	47	48	3.0	4.0
5	李杰	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	25	66	6.0	7.0
6	彭程飞	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	15	25	3.0	3.0