污染水产去甲基化表观遗传毒性EGFP评价方法

• 作者: 张衍粲 张金良 李琴 杨怡姝 段小丽 江艳 满江红 王先良 王小利 王春辉 王菲菲 赵秀阁
• 来源期刊: 中国科学（化学）
• 关键词: 去甲基化 表观遗传毒性 评价载体 EGFP 污染物
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 1548-1554
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.1360/032011-75

摘要

pEGFP-C3质粒经过体外人工甲基化处理后,被转染进入HepG2细胞以构建重组细胞株.以5 -AZA为阳性去甲基化毒物与重组细胞共培养,通过亚硫酸氢钠测序法定量检测EGFP基因启动子区甲基化状态,通过实时定量PCR检测EGFP基因表达,借助流式细胞术和荧光摄片定量检测共培养细胞的绿色荧光强度,在DNA甲基化、EGFP基因mRNA表达、GFP蛋白等多个层次研究5-AZA染毒处理与其去甲基化能力和荧光表达改变的响应关系.对天津污染水产的去甲基化能力进行了实际样品测试.结果表明,5-AZA与重组细胞的DNA甲基化、基因表达、蛋白产物变化之间存在显著关联,具有较低的检出浓度和良好的重复性.天津污染海域的水产去甲基化能力较强.本文初步建立了一种污染物去甲基化表观遗传毒性评价方法.