双转基因小鼠模型中microRNA-153对RTN4的表达调控

• 作者: 刘颖 朱华 梁春联 秦川 许艳峰 邓巍 马春梅 黄澜
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 转基因小鼠 microRNA Reticulon 4
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 32-36,后插3
• 分类号: R541|R332
• 字数: 3449字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2011.05.008

摘要

目的 探讨mir-153在阿尔茨海默病发病机制中的作用.方法 通过microRNA芯片及Real-timePCR检测APPswe/PSAE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达;构建高表达mir-153的稳转细胞系,通过western-blot检测稳转细胞系内RTN4的蛋白表达;构建野生型及突变型RTN4的3'UTR荧光素酶报告载体,分别将其与mir-153表达载体或microRNA阴性对照载体共转染入293T细胞内,检测海肾荧光素酶的相对活性以验证mir-153对RTN4 mRNA的作用靶点.结果 microRNA芯片及Real-time PCR检测均证实3月龄APP8we/PS△E9双转基因小鼠脑内mir-153的表达较同龄野生对照显著降低;在高表达mir-153的稳转细胞系内RTN4的蛋白水平明显降低;共转染野生型RTN4的3'UTR/mir-153表达载体可使海肾荧光素酶相对活性较共转染野生型RTN4的3'UTR/miRNA阴性对照质粒组显著降低(P＜0.05),而共转染突变型RTN4的3'UTR/mir-153表达载体组则较之无明显差异.结论 在3月龄APPswe/PS△E9双转基因小鼠脑内存在mir-153的异常表达;mir-153可调控RTN4的蛋白表达;mir-153对RTN4的表达调控是通过结合RTN4 3'UTR 839-845碱基处的作用位点而实现的.