白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶重组蛋白的制备及鉴定

• 作者: 史利宁 李芳秋 王颖 陆静芬
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 白念珠菌 果糖二磷酸醛缩酶 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 375-377
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 制备有免疫原性的白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)重组蛋白.方法 以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,用PCR法扩增Fba1 DNA序列,与克隆载体pMD18-T连接、测序,再与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组表达质粒pET28a(+)/Fba1,转化大肠埃希菌BL21( DE3),IPTG诱导重组融合蛋白表达,亲和层析柱纯化重组蛋白.用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊为侵袭性白念珠菌病(ICAI)、且抗白念珠菌烯醇化酶抗体阳性的患者血清进行抗原性鉴定.结果 Fba1 DNA序列与GenBank中的序列一致.在大肠埃希菌中获得白念珠菌Fab1重组蛋白的高效表达,表达产物以可溶性蛋白为主,最终蛋白质得率为7.6 mg/g湿菌.经免疫印迹鉴定,重组蛋白与抗His标签的单克隆抗体和确诊ICAI患者血清呈特异性反应,显示出良好的抗原反应性.结论 成功制备了具有良好抗原反应性的重组蛋白,为建立特异性诊断ICAI的新方法打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李芳秋		93	590	11.0	20.0
2	史利宁		75	319	10.0	15.0
3	王颖		25	151	7.0	11.0
4	陆静芬		4	15	2.0	3.0