稳定沉默CXCR4表达的肾癌A498细胞株的构建

• 作者: 吴震杰 孙颖浩 杨庆 王林辉 陈伟 黄霆
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 短发夹RNA CXCR4 肾癌细胞 转染
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1103-1107
• 分类号: R737.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2011.01103

摘要

目的 应用RNA干扰技术降低肾癌A498细胞株的CXCR4基因表达水平,并建立稳定转染细胞株.方法 针对CXCR4基因设计合成siRNA,转染肾癌A498细胞株,采用RT-PCR法检测CXCR4基因表达变化,根据有效干扰片段结果合成重组shRNA质粒,稳定转染至A498细胞系并进行G418抗性筛选细胞株.采用RT-PCR和Westen印迹法检测CXCR4 mRNA及蛋白表达水平,应用流式细胞技术检测CXCR4 shRNA诱导A498细胞凋亡的效应,Transwell试验检测细胞侵袭能力的改变.结果 将CXCR4重组shRNA质粒成功转染A498细胞后,肾癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了CXCR4基因沉默的A498细胞系,RT-PCR及Western印迹检测证实该细胞系的CXCR4水平明显低于对照组的表达水平(P＜0.05).CXCR4 shRNA组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均显著高于对照组(P＜0.05),Transwell体外侵袭实验显示CXCR4 shRNA能明显抑制A498细胞的体外侵袭力(P＜0.05).结论 成功构建稳定沉默CXCR4表达的肾癌A498细胞株,转染后的细胞凋亡率升高,体外侵袭能力降低,为后续研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈伟	第二军医大学长海医院泌尿外科	24	129	7.0	10.0
2	王林辉	第二军医大学长海医院泌尿外科	181	1588	16.0	34.0
3	孙颖浩	第二军医大学长海医院泌尿外科	387	3365	22.0	44.0
4	杨庆	第二军医大学长海医院泌尿外科	75	840	12.0	27.0
5	吴震杰	第二军医大学长海医院泌尿外科	30	149	7.0	10.0
6	黄霆	解放军81医院泌尿外科	3	5	2.0	2.0