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人内皮型一氧化氮合成酶基因重组腺病毒载体构建及其在人血管平滑肌细胞的表达
人内皮型一氧化氮合成酶基因重组腺病毒载体构建及其在人血管平滑肌细胞的表达
作者:
兰勇
李大军
王玉琦
符伟国
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
一氧化氮合成酶
血管平滑肌细胞
基因转染
摘要:
目的 利用AdMax腺病毒载体系统构建人内皮型一氧化氮合成酶基因(heNOS)重组腺病毒并检测其在体外培养人血管平滑肌细胞中表达.方法 将质粒PMSCV-heNOS通过聚合酶链反应(PCR)法扩增出heNOS全长基因,插入PSUCMV中构建成腺病毒穿梭质粒PSUCMV-heNOS,转化DH5α大肠杆菌,挑选细菌单克隆进行DNA测序,酶切鉴定正确;通过PSUCMV-heNOS与质粒pBHGE3在293细胞中同源重组,得到携带heNOS基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(AdCMV-he-NOS).转染体外培养的人血管平滑肌细胞,MTT检测细胞增殖,用免疫组织化学和Western blot等方法检测heNOS蛋白的表达.结果 (1)PCR产物电泳结果,酶切鉴定和测序鉴定结果证实构建人eNOS重组腺病毒载体成功,病毒滴度达3.5×l010PFU/ml;(2)根据体外培养的人血管平滑肌细胞(HVSMCs)形态学变化,免疫组织化学进行平滑肌细胞表型标志物α-actin染色,证实为HVSMCs;(3)转染120 h,AdCMV-heNOS病毒感染复数(MOI)分别为50、150、250、300、450、A570值分别为1.410±0.081、1.357±0.150、1.303±0.311、0.995±0.248、0.731±0.101,其中感染复数300明显稳定抑制血管平滑肌细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.01).免疫组织化学和Western blot检测显示转染细胞heNOS蛋白明显表达.结论 heNOS重组腺病毒的构建及其表达为血管内膜增生等疾病的基因治疗提供可能.
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文献信息
篇名
人内皮型一氧化氮合成酶基因重组腺病毒载体构建及其在人血管平滑肌细胞的表达
来源期刊
中华实验外科杂志
学科
医学
关键词
一氧化氮合成酶
血管平滑肌细胞
基因转染
年,卷(期)
2011,(2)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
222-225
页数
分类号
R3
字数
3434字
语种
中文
DOI
10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2011.02.022
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
符伟国
复旦大学附属中山医院血管外科
278
1148
15.0
21.0
2
王玉琦
复旦大学附属中山医院血管外科
133
817
14.0
23.0
3
李大军
卫生部北京医院血管外科
19
80
4.0
8.0
4
兰勇
卫生部北京医院血管外科
9
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2.0
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研究主题发展历程
节点文献
一氧化氮合成酶
血管平滑肌细胞
基因转染
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华实验外科杂志
主办单位:
中华医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-9030
CN:
42-1213/R
开本:
大16开
出版地:
武汉市东湖路165号
邮发代号:
38-85
创刊时间:
1984
语种:
chi
出版文献量(篇)
17168
总下载数(次)
19
总被引数(次)
69898
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