利用噬菌体肽库序贯筛选组织因子靶向肽

• 作者: 梁绮雯 汪建平 肖刚 许希 饶本强
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 组织因子 噬菌体展示技术 跨膜受体 筛选 靶向肽
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 2429-2432
• 分类号: R331
• 字数: 4602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.12.038

摘要

目的:建立一种高效的筛选跨膜受体靶向肽的噬菌体展示新方法,据此筛选出组织因子( TF) 高亲和力靶向肽.方法:分别以纯化TF蛋白和具有TF高特异性表达的结直肠癌细胞株HT-29为靶标,用噬菌体七肽库进行序贯筛选(受体-细胞序贯筛选法,STRCA法),ELISA初步鉴定噬菌体克隆对HT-29亲和力.对噬菌体克隆进行测序,利用竞争抑制 ELISA比较各合成肽的TF结合力.重复实验检测筛选结果的可靠性.结果:经过5轮筛选,与TF结合的噬菌体得到了富集,回收率由(2.25×10-4)%增加到(1.32×10-2)%;ELISA结果显示30个克隆中,阳性率为76.7%.噬菌体测序结果中,4种合成肽(分别命名为A、B、C、D肽)中A肽序列重复率为23.3%(7/30),B肽为23.3%(7/30),C肽为26.7%(8/30),D肽为10.0%(3/30);E肽为A、B肽合成的复合靶向肽.经竞争抑制 ELISA比较5种肽的TF亲和力,其IC50分别为3.25 nmol/L、6.72 mol/L、3.24×103 mol/L、2.08×102 mol/L和45.77 mol/L.重复实验所获得的阳性噬菌体克隆序列与第1次实验相比,重复率为33.3%.结论:STRCA法是一种理想的筛选跨膜受体靶向肽方法,采用该法获得的TF靶向肽对TF具有高度的亲和力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖刚	中山大学附属第六医院检验科	38	158	6.0	9.0
2	汪建平	中山大学附属第六医院结直肠外科	141	1371	20.0	31.0
3	梁绮雯	中山大学附属第六医院检验科	2	6	2.0	2.0
4	饶本强	中山大学附属第六医院结直肠外科	5	11	2.0	2.0
5	许希	广州医学院附属第一医院血液内科	3	7	2.0	2.0