特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

• 作者: 刘天津 卢奕 杨晋 蒋永祥
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 单纯疱疹病毒酶 胸苷激酶 晶状体上皮细胞 特异性启动子 LEP503 自杀基因系统
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 912-916
• 页数: 5页
• 分类号: R776
• 字数: 5146字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)特异性启动子LEP503(lens epithelium gene product 503)调控的Lenti- LEP503 -HSV-tk-EGFP载体,观察慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙环鸟苷系统(herps simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的靶向性抑制作用.方法 用RT-PCR方法从HLEC基因组中克隆LEP503启动子序列,构建单纯LEP503启动子调控HSV-tk基因表达的慢病毒载体Lenti-LEP503 - HSV-tk-EGFP,同时构建广谱启动子巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)调控的HSV-tk载体Lenti- CMV-HSV-tk-EGFP.将特异性表达载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC和Hela细胞,用荧光显微镜观察荧光强度,用RT-PCR方法评估相关蛋白的组织特异性表达.将Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP和Lenti-CMV -HSV-tk-EGFP分别转入HLEC,通过荧光显微镜观察EGFP的袁达,用流式细胞仪及PT-PCR比较CMV与LEP503启动子介导下游靶基因HSV-tk的表达差异.结果 Lenti-LEP503-HSV -tk-EG FP能在HLEC中特异性表达,但Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的表达效率明显低干Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP.转染Lenti-LEPS03-HSV-tk-EGFP的HLEC在20mg· L-1 GCV作用48h后EGFP阳性细胞的形态发生明显变化；GCV作用24h后Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP转染HLEC较正常HLEC和Lenti-LEP503 -HSV-tk-EGFP转染Hela细胞活性有明显抑制,且随时间的延长抑制效果逐渐增强.结论 LEP503启动子能介导HSV-tk基因在HLEC中特异表达,并介导HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性抑制 HLEC增殖,但该启动子表达效率较低,所介导的HSV-tk/G CV系统对HLECs增殖的抑制效率低于CMV启动子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢奕	复旦大学附属眼耳鼻喉科联院眼科	142	511	11.0	15.0
2	杨晋	复旦大学附属眼耳鼻喉科联院眼科	21	58	5.0	7.0
3	刘天津	复旦大学附属眼耳鼻喉科联院眼科	1	0	0.0	0.0