H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白在原核系统中的表达

• 作者: 乔传玲 包红梅 姜永萍 王秀荣 石锐 陈化兰 陈维多
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感 H9 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 86-90
• 分类号: S855.3|S852.65
• 字数: 3722字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2011.12.017

摘要

应用带有His6尾的pET原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,将禽流感A/Turkey/Wisconsin/66(HgN2)的HA基因克隆至原核表达载体pET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入,并且阅读框正确,获得重组质粒pET30a-H9.将此重组质粒转化到宿主菌BL21中,用诱导剂异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导,产物处理后进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹和薄层扫描分析.结果发现HA蛋白可被大量表达,主要以包涵体形式存在,表达产物分子质量约64 ku,与理论推测值一致；菌液OD600值为1.0、IPTG终浓度为0.3 mmol· L-1、诱导时间4h,其蛋白表达量最大,约占菌体蛋白总量的35％左右；通过免疫印迹试验发现,表达的蛋白可被禽流感H9亚型阳性血清特异性识别.研究结果表明,可以用原核表达系统对禽流感病毒血凝素蛋白进行表达,其产物具有免疫原性,可以用作禽流感抗体检测的免疫诊断试剂.