PCR-RFLP方法检测PARL基因Leu262Val多态性的实验研究

• 作者: 代莉 宋滇平 李会芳 王玉明
• 来源期刊: 昆明医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 PARL基因 实验条件
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 27-30,46
• 分类号: Q786
• 字数: 2788字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-4706.2011.05.008

摘要

目的 探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测PARL基因Leu262Val多态性的最适实验条件.方法 在PCR实验中,运用降落PCR(touchdown PCR,TD-PCR)方法优化PCR条件;对引物终浓度设定0.8 μmol/L、0.6 μmol/L、0.4 μmol/L和0.32 μmol/L四个浓度梯度进行扩增;通过2%琼脂糖凝胶电泳观察结果.在RFLP实验中,在内切酶量10 U不变的情况下,PCR产物量分别设定为5 μL、10 μL、15 μL;酶切时间分别设定为12 h、8 h、4 h、2 h、1 h酶切,反应完毕后通过2%琼脂糖凝胶电泳观察结果.结果 (1)降落PCR方法能有效降低或避免非特异性扩增;(2)引物浓度为0.4 μmol/L时,PCR产物量高且引物二聚体较少;(3)10 μL的PCR产物进行酶切,电泳结果清晰;(4)在37℃条件下酶切4 h能完全消化一个酶切体系中的PCR产物.结论 PCR实验中,TD- PCR优化了PCR条件,为扩增目的条带提供了快速、特异、可靠的方法,最适引物浓度为0.4 μm/L;RFLP实验中,最有效酶切方案为20 μL的体系中加10 μL产物和10 U内切酶,37 ℃消化4 h.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋滇平	昆明医学院第一附属医院糖尿病科	119	396	10.0	12.0
2	李会芳	昆明医学院第一附属医院检验科	19	27	2.0	4.0
3	王玉明	昆明医学院第一附属医院检验科	93	374	8.0	15.0
4	代莉	昆明医学院第一附属医院糖尿病科	9	20	3.0	4.0