甲型H1N1流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的初步建立

• 作者: 刘旺根 周春峰 孙新城 昌静峰 李恒思 李玉林 王云龙 王国强 董彩文 陈冬焕
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 血凝素 甲型H1N1流感病毒 原核表达 双抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 37-41
• 分类号: S5852.659.5
• 字数: 3273字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2011.08.008

摘要

建立甲型H1N1流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法,通过优化IPTG浓度和诱导时间确定HA融合蛋白的最佳表达条件,并进行Western bloc和血凝试验鉴定.用纯化蛋白制备单克隆抗体,建立检测甲型H1N1流感病毒的双抗体夹心ELISA检测方法,对其交叉反应、符合率进行验证.结果表明,HA蛋白在BL21 (DE3)中得到表达,主要以包涵体的形式存在,分子质量为64 ku,最佳诱导条件为IPTG终浓度0.2 mmol/L,诱导时间4h.Western blot鉴定其与H1N1病毒有相同的抗原性,血凝试验表明无血凝活性.制备HA单抗并初步建立双抗体夹心ELISA检测方法,检测100份阳性PCR样本,符合率为96％.建立的夹心ELISA方法可用于H1N1亚型流感病毒的初步诊断.