二重荧光定量RT-PCR检测胰腺癌患者CD44v6基因的表达

• 作者: 何丽华 周刚 徐克成 牛立志 秦大江 蔡金蕾 邱大卫 黄文浩
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 胰腺癌 CD44v6
• 年，卷（期）: 2011,（18）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2051-2054
• 分类号: R735.9
• 字数: 3894字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2011.18.004

摘要

目的 建立一种敏感、特异的二重TaqMan实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法,定量检测CD44v6基因在胰腺癌患者中的mRNA表达水平.方法 设计目的 基因CD44v6和内参基因β-actin的引物与探针并构建两者的重组质粒,通过优化反应条件,建立二重qRT-PCR方法的标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估.应用该方法定量检测18例胰腺癌患者外周血单核细胞(PBMC)中CD44v6 mRNA的表达水平.结果 成功了构建该方法的标准曲线,其特异性较高,重复性良好,CD44v6和β-actin基因的检测下限均达到100 copy/μL,是常规RT-PCR的10倍,7例胰腺癌患者百万PBMC中CD44v6表达量的对数值为3.4～3.9,另9例为3.9～4.9,仅2例在5.0以上.结论 本研究建立的二重qRT-PCR方法可定量检测CD44v6基因的表达水平,并对试验个体及试验组的CD44v6 表达水平进行比较,从而为胰腺癌的诊断、预后及治疗效果的评估提供了有效的手段.