鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 张艳芳 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 鸭坦布苏病毒 鸭瘟病毒 二重RT-PCR 特异性 敏感性
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 314-317
• 页数: 4页
• 分类号: S858.32
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.2.314

摘要

[目的]建立可同时检测鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)与鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)的二重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.[方法]根据GenBank中DTMUVE基因和DPVUL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的二重RT-PCR.[结果l优化后的二重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,混合模板2.0 μL,ddH2O补足至25.0 μL;最佳反应程序:95℃预变性5 min;95℃1 min,54.4℃l min,72℃1 min,进行35个循环;72℃延伸10 min.该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感.[结论]建立的二重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断.