鸭瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 万春和 傅光华 傅秋玲 刘荣昌 施少华 程龙飞 陈红梅 陈翠腾 黄瑜
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 鸭瘟病毒 gE基因 TaqMan探针 实时荧光定量PCR方法
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 722-728
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2018.06.014

摘要

根据鸭瘟病毒(DEV)gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×101～1.0×106拷贝·μL-1时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性扩增,其标准曲线方程为:y=-3.480x+37.955,扩增相关系数为0.999;敏感性强,最低检测限为10拷贝·μL-1;特异性好,仅对DEV强毒株和弱毒活疫苗株检测到阳性扩增信号,对鸭源其他传染病病原(番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、禽1型副粘病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62％～1.14％和0.69％～2.40％.对临床送检疑似DEV感染的14份样品进行检测,并与常规PCR方法、病毒分离鉴定进行比较,阳性率分别为85.71％(12/14)、71.43％(10/14)和57.14％(8/14);且与常规PCR方法、病毒分离鉴定的阳性符合率均为100％.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,可用于开发DEV快速诊断试剂盒,用于开展DEV流行病学调查.