猪轮状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法的建立

• 作者: 严山 修金生 吴学敏 周伦江 章秋月 陈如敬 陈秋勇
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 猪轮状病毒 TaqMan 实时荧光定量RT-PCR方法
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 212-216
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2018.02.013

摘要

根据GenBank中登录的猪轮状病毒(PoRV)VP6基因序列特征,设计特异性的引物和探针,条件优化后,建立检测PoRV TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法.结果表明:建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法敏感性高,最低可检测192拷贝.μL-1;特异性强,对猪常见病原(如猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒等)检测均为阴性;重复性好,扩增相关系数为0.999,其组内和组间变异系数分别为0.25%~1.26%和0.31%~1.49%.对临床收集的79份猪腹泻病料进行常规RT-PCR检测,检测出阳性样品4份,阳性率为5.06%(4/79);对这79份病料进行TaqMan实时荧光定量 RT-PCR方法检测,检测出阳性样品6份,阳性率为7.59%(6/79);同时,4份经RT-PCR检测为阳性的样品经TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测均为阳性,符合率达100%.本研究建立的方法为PoRV早期感染诊断提供检测手段.