新型鸭呼肠孤病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 侯绍华 孟利佳 张博 武华 董世山 郭康康 阴雅洁 陈立功
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 新型鸭呼肠孤病毒 σB基因 荧光定量 RT-PCR TaqMan探针 应用
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 页码范围: 80-84
• 页数: 5页
• 分类号: S852
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2020.0098

摘要

为了快速、准确检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV),本试验采用NDRVσB基因的序列保守区,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了NDRV实时荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线,并进行特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验.结果 表明:所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线方程为y=-3.354x+44.818,扩增效率为98.7％,标准曲线的相关系数为0.999;该方法可以特异性检测NDRV,但对MDRV、ARV、TMUV、DHAV均无反应信号;该方法检测质粒标准品最低检测浓度为10拷贝/μL,是普通PCR方法检测敏感性的1000倍;该方法的组内与组间变异系数均小于2％;用该方法检测临床样品,结果显示NDRV阳性率为45％,而常规RT-PCR阳性率为33％,比常规RT-PCR敏感.说明本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法可为NDRV的监测和早期诊断提供可靠的技术支撑.