禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 文艳玲 童桂香 谢丽基 谢芝勋 邓显文 黄琦
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽呼肠孤病毒 体外转录 SYBR Green Ⅰ 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 767-771
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.4|Q503
• 字数: 4302字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2007.09.009

摘要

为建立禽呼肠孤病毒(ARV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定、Sal I单酶切,得到线性化转录模板DNA,将体外转录的RNA梯度稀释后作为阳性模板,用于标准曲线的制定.根据S1基因σC结构蛋白基因保守区域序列设计了1对特异性引物,以体外转录的RNA作为标准品,应用SYBR Green Ⅰ染料法建立了检测ARV的一步法实时荧光定量RT-PCR方法.特异性、敏感性和重复性试验结果表明,制作的标准曲线定量浓度范围宽,比常规的RT-PCR敏感1×103倍,可检测到5.2×102个拷贝的标准品RNA,与NDV、IBDV、MG均不反应;从攻毒鸡的关节组织中可以检测到病毒,病毒含量为1×105～1×107个拷贝/μL.表明,建立的实时荧光定量RT-PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于ARV的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘加波		118	1407	21.0	29.0
2	谢芝勋		139	1616	23.0	31.0
3	庞耀珊		118	1412	21.0	30.0
4	邓显文		118	1428	21.0	30.0
5	谢丽基		73	730	16.0	23.0
6	文艳玲	广西大学动物科技学院	5	105	4.0	5.0
7	黄琦	广西大学动物科技学院	11	59	3.0	7.0
8	童桂香	广西大学动物科技学院	3	61	3.0	3.0